化學(xué)發(fā)光是免疫診斷當(dāng)中，目前在臨床上應(yīng)用最為廣泛，技術(shù)最為先進(jìn)的技術(shù)手段之一，其主要利用抗原與抗體的免疫反應(yīng)，在發(fā)光底物的激發(fā)下，發(fā)出光信號(hào)，達(dá)到對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行定量或者半定量的檢測(cè)方法。其中抗原抗體是化學(xué)發(fā)光試劑最為核心，最為重要的原料，其質(zhì)量直接影響試劑的質(zhì)量。在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光試劑研發(fā)，如何選擇抗原抗體，其質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)有哪些，本文帶你了解抗體的那些事兒。

什么是化學(xué)發(fā)光法？

“化學(xué)發(fā)光"一詞是由Eilhardt Weidemann（1888年）提出的。化學(xué)發(fā)光，是指當(dāng)外源性反應(yīng)的振子興奮產(chǎn)物松弛到其基態(tài)并發(fā)射光子時(shí)所觀察到的現(xiàn)象，可以用簡(jiǎn)單的術(shù)語(yǔ)來(lái)定義：發(fā)出光的化學(xué)反應(yīng)。化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生足夠的能量（藍(lán)光發(fā)射約300 kJ/mol，紅光發(fā)射約150 kJ/mol），以誘導(dǎo)電子從其基態(tài)過(guò)渡到激發(fā)電子態(tài)。這種電子轉(zhuǎn)換往往伴隨著分子的振動(dòng)和旋轉(zhuǎn)變化。

在有機(jī)分子中，最經(jīng)常遇到的是從π鍵軌道到π*反鍵軌道（π→π*）或從非鍵軌道到反鍵軌道（n→π*）的轉(zhuǎn)變。因此，電子返回基態(tài)并發(fā)射光子被稱(chēng)為化學(xué)發(fā)光。被激發(fā)的分子也可以通過(guò)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、碰撞失活、內(nèi)部轉(zhuǎn)換或系統(tǒng)間交叉而失去能量。從分析的角度來(lái)看，這些輻射較少的過(guò)程是不可取的，因?yàn)樗鼈兣c化學(xué)發(fā)光競(jìng)爭(zhēng)（見(jiàn)下圖）。

當(dāng)兩個(gè)分子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而有能量釋放時(shí)（放熱反應(yīng)），這種能量有時(shí)不是表現(xiàn)為熱，而是表現(xiàn)為光。這是因?yàn)槟芰考ぐl(fā)了它所流入的產(chǎn)物分子。處于這種激發(fā)狀態(tài)的分子要么放松到基態(tài)，直接發(fā)光，要么將其能量轉(zhuǎn)移到第二個(gè)分子，后者成為發(fā)光體。這個(gè)過(guò)程被稱(chēng)為化學(xué)發(fā)光（見(jiàn)下圖）。

A+B→AB*→產(chǎn)物+光

化學(xué)發(fā)光的原理

免疫反應(yīng)。抗原進(jìn)入機(jī)體，刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使之產(chǎn)生免疫應(yīng)答，這種反應(yīng)叫免疫反應(yīng)。免疫反應(yīng)應(yīng)答包括對(duì)抗原物質(zhì)的感應(yīng)、反應(yīng)、效應(yīng)三個(gè)連續(xù)的階段。

免疫分析（immunoassay，IA）。在臨床檢驗(yàn)中，基于抗原與其配對(duì)抗體能夠發(fā)生特異反應(yīng)，用已知的抗原或抗體檢測(cè)分析體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。

高特異性。抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。抗原抗體反應(yīng)的高特異性是免疫學(xué)檢測(cè)的基礎(chǔ)。

高親和性。抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。

化學(xué)發(fā)光中的抗原和抗體

在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑，抗原和抗體是最為核心的原料，抗原和抗體的質(zhì)量直接影響成品試劑的質(zhì)量，抗原抗體占據(jù)原料市場(chǎng)45%左右的市場(chǎng)。且在化學(xué)發(fā)光領(lǐng)域，由于檢測(cè)試劑與儀器是封閉系統(tǒng)，也就導(dǎo)致上游原料的抗原和抗體無(wú)法通用，不同的儀器對(duì)應(yīng)的試劑所需要的抗原和抗體的指標(biāo)要求也不盡相同。正常情況下，在抗體的質(zhì)量評(píng)價(jià)中主要有以下的評(píng)價(jià)指標(biāo)：

抗體親和力：

抗體與抗原表位或抗原決定簇之間的結(jié)合力稱(chēng)為抗體親和力，體現(xiàn)了一個(gè)抗體分子和一個(gè)半抗原分子或抗原分子的一個(gè)決定簇起反應(yīng)的能力。高親和力抗體診斷原料并不代表高性能試劑，針對(duì)不同種類(lèi)的標(biāo)志物，對(duì)于親和力的需求有一定差異。

線(xiàn)性范圍：

指分析方法在給定范圍內(nèi)獲取與樣品中待測(cè)物濃度成正比的試驗(yàn)結(jié)果的能力，是反映分析方法檢測(cè)范圍和準(zhǔn)確性的直接指標(biāo)。

特異性：

指抗體單一性識(shí)別某種特定抗原的能力。特異性雖然不直接影響試劑整體反應(yīng)性，但是卻對(duì)于檢測(cè)結(jié)果有著很重要的影響。

純度：

在體外診斷試劑制備過(guò)程中，抗體標(biāo)記效率與抗體的純度有關(guān)。通常與細(xì)胞培養(yǎng)工藝和抗體純化工藝所決定。

穩(wěn)定性：

是指在特定的儲(chǔ)存條件下，一定時(shí)間內(nèi)抗體保持其活性的能力。在抗體修飾/偶聯(lián)前的穩(wěn)定性是抗體真實(shí)的穩(wěn)定性，修飾/偶聯(lián)后的抗體穩(wěn)定性主要取決于制備工藝。